CytoskeletonRhoGAP检测方案

Ras 小 GTP 酶超家族&＃xff08;如 Ras、Rho、Rab、Arf 和 Ran 蛋白&＃xff09;作为二元开关在 GDP 结合的“关闭状态”和 GTP 结合的“开启状态”之间循环&＃xff0c;调节下游信号。在细胞中&＃xff0c;两种状态之间的循环主要由两种调节蛋白控制&＃xff1a;激活的鸟嘌呤核苷酸交换因子 (GEF) 和失活的 GTP 酶激活蛋白 (GAP)。

Ras 超家族的小 G 蛋白通常具有内在的 GTPase 活性&＃xff0c;这意味着在它们被 GEF 激活&＃xff08;GTP 结合&＃xff09;后&＃xff0c;它们最终会“自行关闭”。然而&＃xff0c;内在的 GTPase 速率通常非常缓慢&＃xff0c;因此“自动”关闭过程可能需要长达数小时。

由于大多数 Ras 超家族 GTP 酶的内在 GTP 酶活性较慢&＃xff0c;因此它们的 GAP 是重要的信号分子&＃xff0c;其功能是终止其信号传导。GAP 通过与其靶 G 蛋白的活性、GTP 结合形式结合并J大地刺激 G 蛋白的内在 GTP 酶活性而发挥作用&＃xff0c;从而迅速关闭 G 蛋白。

Cytoskeleton 艾美捷 GAP 检测试剂盒可测量因 GTP 依赖 G 蛋白水解为 GDP &＃43; P i而产生的无机磷酸盐 (P i ) 的量。该试剂盒包含检测所需的所有试剂&＃xff0c;包括 GTP 酶、阳性对照 RhoGAP、精心优化的缓冲液和磷酸盐检测试剂。该测定可以在 96 孔板或 384 孔板中进行。96 孔格式有足够的试剂用于 80 次测定&＃xff08;每种提供的 GTPase 20 次&＃xff09;和 384 孔格式的 160 次测定&＃xff08;每种提供的 GTPase 40 次&＃xff09;

Cytoskeleton 艾美捷该试剂盒包含 Cdc42、Rac1、RhoA 和 Ras 蛋白&＃xff0c;但它也可用于任何其他 Ras 超家族 GTPase。

Cytoskeleton  艾美捷RhoGAP 检测试剂盒用途包括&＃xff1a;

1.确定未表征的 GAP 的活性和 GTPase 特异性。

2.小 GTP 酶及其相关 GAP 的生化表征。

3.检查不同辅因子或蛋白质结构域对 GAP 活性的调节。

4.筛选 GAP 或 GTPase 的突变蛋白的活性和底物特异性。

5.以 HTS&＃xff08;高通量筛选&＃xff09;形式鉴定 GAP 抑制剂。

Cytoskeleton 艾美捷该示例结果&＃xff1a;

测试了添加和不添加 p50RhoGAP 催化结构域的 RhoA 的 GTPase 活性&＃xff08;如下图&＃xff09;。

图&＃xff1a; RhoA 蛋白对 GTP 水解测量的 RhoGAP 活性。每个反应包含反应缓冲液 &＃43; GTP&＃xff0c;并添加单独的 RhoA (RhoA)、单独的 RhoGAP (GAP) 或 RhoA &＃43; RhoGAP (RhoA &＃43; GAP)。反应在 37°C 下孵育 20 分钟。通过添加 CytoPhos™ 试剂并读取 650 nm 处的吸光度来测量 GTP 水解产生的磷酸盐。

Cytoskeleton相关研究工具&＃xff1a;

RhoGEF 交换试验 (BK100)

Rho 抑制剂 I&＃xff08;CT04&＃xff09;

罗丹明鬼笔环肽&＃xff08;PHDR1&＃xff09;

Rho 激活剂 I&＃xff08;CN01&＃xff09;