尿酸酶丨Worthington猪肝尿酸酶的特征：

尿酸盐&＃xff1a;O 2氧化还原酶

尿酸酶&＃xff08;尿酸氧化酶&＃xff09;催化以下整体反应&＃xff1a;

Urate&＃43;O2&＃43;H2O→Allantoin&＃43;H2O2&＃43;CO2

该反应代表除人类、高等猿和达尔马提亚犬之外的所有哺乳动物中嘌呤分解代谢的终止。

Mahler (1963) 对这种酶进行了综述。

尿酸酶对于生物体液中尿酸的测定非常重要。反应不仅具有特异性&＃xff0c;还可以在 292 nm、340 nm 或通过耦合显色响应进行比色监测。非酶促方法会受到混浊或存在阿司匹林、抗坏血酸、谷胱甘肽、扑热息痛和许多抗生素的干扰。参见 Itiaba等人。&＃xff08;1975&＃xff09;&＃xff1b;关等人。&＃xff08;1975&＃xff09;&＃xff1b;佩斯等人。&＃xff08;1974&＃xff09;&＃xff1b;Gökicke 和 Gökicke (1973)&＃xff1b;卡巴萨卡连等人。&＃xff08;1973&＃xff09;&＃xff1b;拉姆和甘比诺 (1973)&＃xff1b;斯蒂尔 (1970) 和特洛伊和珀迪 (1970)。

艾美捷 Worthington猪肝尿酸酶的特征&＃xff1a;

分子量&＃xff1a;125,000 (Pitts et al . 1974)。

组成&＃xff1a;该酶由 32,000 MW 的四个亚基组成&＃xff0c;每个分子 (125,000 MW) 有一个铜原子 (Pitts et al . 1974)。

最佳 pH 值&＃xff1a;9.0 (Mahler 1963)。

消光系数&＃xff1a;&＃61; 11.3 消光系数(Mahler 1963)。

等电点&＃xff1a;6.3 (Mahler 1963)。

抑制剂&＃xff1a;尿酸盐的各种嘌呤类似物&＃xff08;Bergmann等人1963&＃xff1b;Baum等人1956&＃xff09;、氰化物和其他铜螯合剂。Fridovich (1965) 报告说&＃xff0c;碱性溶液中的尿酸盐可以转化为有效的抑制剂&＃xff0c;氧酸盐。

特异性&＃xff1a;该酶对尿酸具有高度特异性。&＃xff08;见马勒 1963 年&＃xff09;。

稳定性&＃xff1a;在 10% 饱和硫酸铵中纯化的尿酸酶在 5°C 下可稳定一年。

艾美捷Worthington尿酸酶测定方法&＃xff1a;

Method : 反应速度是通过测量尿酸氧化成尿囊素导致的 290 nm 处吸光度的降低来确定的。在特定条件下&＃xff0c;一个单位在 25°C 和 pH 8.5 下每分钟氧化 1 微摩尔尿酸。

试剂&＃xff1a;

1.0.1 M 硼酸钠缓冲液&＃xff0c;pH 8.5

2.0.12 mM 尿酸。将 60 mg 碳酸锂溶解在 15 ml 水中并过滤。通过将 100 mg 尿酸溶解在滤液中来制备新鲜溶液。可能需要加热至 50-60°C 以产生溶液。冷却并用试剂级水定容至 100 ml。用 0.1 M 硼酸盐稀释 1/100&＃xff0c;pH 8.5。

注意&＃xff1a;使用前&＃xff0c;0.1 M 硼酸钠缓冲液和 0.12 mM 尿酸溶液应通过将 O 2鼓泡通过溶液 10-15 分钟进行氧化。每 20 分钟再充氧一次。

酶&＃xff1a;

以 1 mg/ml 溶解于冷 (5°C) 0.1 M 硼酸钠缓冲液&＃xff0c;pH 8.5。

方程&＃xff1a;

在即将进行测定之前&＃xff0c;进一步稀释至 0.01-0.1 单位/ml 的浓度。

程序&＃xff1a;

将分光光度计调整到 290 nm 和 25°C。

移液器如下&＃xff1a;

硼酸盐缓冲液 0.5 毫升

0.12 毫米尿酸 2.0毫升

在分光光度计中孵育 4-5 分钟以达到温度平衡并确定空白率&＃xff08;如果有&＃xff09;。在零时间添加 0.5 ml 酶并记录 A 290的下降6-7 分钟。从曲线的初始线性部分计算 ΔA 290 。

Worthington核心酶&＃xff1a;包括&＃xff1a;胶原蛋白酶&＃xff0c;脱氧核糖核酸酶I&＃xff0c;弹性蛋白酶&＃xff0c;木瓜蛋白酶&＃xff0c;核糖核酸酶&＃xff0c;胰蛋白酶等。